结构基础：SYTOX Orange Nucleic Acid Stain是一种高亲和力核酸嵌入染料。
化学结构设计使其仅能穿透膜受损的死细胞，无法进入活细胞。
其作用机制基于与DNA/RNA的强结合力，结合后荧光强度增强>500倍。
结合模式：通过单嵌入（mono-intercalation） 与双链DNA结合，每个染料分子使DNA轮廓长度增加一个碱基对，且结合力随张力升高而增强。
存在两种模式：低浓度时以嵌入为主，高浓度时转为次要凹槽结合。
试剂信息英文名称：SYTOX Orange Nucleic Acid Stain (5 mM in DMSO) 死细胞橙色荧光核酸染料
中文名称：SYTOX Orange死细胞橙色荧光核酸染料
展开剩余81%激发波长（Abs） ：547 nm
发射波长（Em） ：570 nm
荧光量子产率：0.9
状态：常温下为红色溶液
纯度：≥95%
生产厂商：西安强化生物科技
&标准操作流程（1）储存液准备
储存条件：-20℃避光干燥保存，有效期≥1年。运输需冰袋。
解冻操作：使用前室温平衡温度，短暂离心使DMSO溶液沉至管底。
避光要求：全程避光操作，减缓荧光淬灭。
（2）工作液配置
稀释缓冲液：生理缓冲液（如PBS）。
浓度指南：
细胞类型：细菌
工作浓度：0.01–0.1 µM
孵育条件：涡旋混匀，≥5 min
细胞类型：酵母
工作浓度：0.05–0.5 µM
孵育条件：≥10 min，周期性摇晃
细胞类型：哺乳动物/真核细胞
工作浓度：0.1–5 µM
孵育条件：≥10 min
（3）配置示例：
储存液浓度：5 mM (5000 µM)
取1 µL储存液 + 999 µL缓冲液 → 5 µM中间液
再取200 µL中间液 + 800 µL细胞悬液 → 终浓度1 µM
（4）染色步骤
样本准备：
细胞悬液调整至 1×10⁵–5×10⁷ cells/mL。
去除培养基残留，用缓冲液（如PBS）重悬。
加染料孵育：
直接加入SYTOX Orange工作液至细胞悬液，轻柔混匀。
孵育条件：室温或2–6℃避光，时间≥10 min（真核细胞）或≥5 min（细菌）。
流式标准流程：孵育≥20 min。
终止与检测：
无需洗涤：染料结合稳定，洗涤可能导致假阴性。
立即检测：避免长时间放置导致荧光衰减。
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本试剂用于科研领域，其他用途概不适用！
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